Resumo

Objetivos: Desenvolvimento e validação de protocolo de isolamento e identificação de bactérias anaeróbias de amostras de placa bacteriana. Materiais e métodos: Este estudo foi realizado em dois voluntários do sexo feminino, com uma média de idade de 34 anos. A coleta de amostras de placa bacteriana foi realizada de foram similar, mediante a inserção de cureta estéril nas faces proximais dos dentes. As amostras foram transferidas para um tubo com PBS estéril e transportadas para o laboratório, para assegurar o crescimento de bactérias anaeróbias. Posteriormente, foram semeadas no meio de cultura ágar cérebro coração com a adição de sangue de cavalo desfibrinado (5%), menadiona (1 mg /L) e hemina (5 mg/L). A incubação foi realizada em jarra de anaerobiose com uma atmosfera de 10% dióxido de carbono, 10% hidrogénio e 80% nitrogénio a 37.ºC por 7 a 14 dias. Da variedade de colónias isoladas, 8 delas foram subcultivadas com base nas suas características morfológicas. A identificação presuntiva das colónias foram determinadas mediante observação e aquisição de imagens pelo microscópio estereoscópico, coloração de Gram, prova da catalase e provas bioquímicas com o rapid id 32 A. Resultados: Todas as placas apresentaram reação positiva fraca à prova da catalase. A coloração de Gram revelou semelhanças entre as placas 1,5 e 8, bacilos Gram?variável ou Gram? positivo, porém a cor e morfologia das colónias varia entre as placas. O rapid id 32 A não apresentou resultados conclusivos, salvo a placa 1 que foi identificada como Actinomyces viscosus (91,7%), reforçando o diagnóstico presuntivo para os géneros Actinomyces, Lactobacillus ou Propionibacterium. As placas 2, 3 e 4 revelaram semelhanças perante a coloração de Gram, cocos Gram? variável ou Gram? positivo, contudo a morfologia e a cor das colónias diferem. Estas características sugerem que as colónias podem pertencer aos gêneros Staphylococcus, Moraxella ou Parvimonas. Quando avaliada a coloração de Gram da placa 6, esta revelou bacilos Gram?negativo, características que se assemelham aos géneros Fusobacterium ou Leptotrichia. A coloração de Gram da placa 7 revelou cocos Gram?negativos, que podem pertencer ao genero Neisseria. Conclusões: O protocolo desenvolvido permitiu o isolamento e identificação presuntiva de bactérias anaeróbias. No entanto, serão necessários ensaios moleculares para uma identificação correta dessas colónias a nível de espécie.